&核心结构

Annexin V-iFluor 568 conjugate 是一种用于细胞凋亡检测的荧光标记试剂，由 Annexin V 蛋白与 iFluor 568 荧光染料共价结合而成。

其技术背景源于细胞凋亡研究中对早期事件的检测需求，通过荧光标记实现高灵敏度、多色兼容的细胞分析。

Annexin V-iFluor 568 conjugate 的核心组成包括：

Annexin V 蛋白：一种钙依赖性磷脂结合蛋白，对磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）具有高度亲和力。

iFluor 568 染料：一种合成荧光团，激发波长约 578 nm，发射波长约 603 nm，呈现红橙色荧光，具有高亮度和光稳定性。

基本特性：

光谱特性：激发波长约为 578 nm，发射波长约为 603 nm，适用于 561 nm 或 568 nm 激光器的激发，荧光信号明亮且背景干扰低。

高灵敏度和特异性：Annexin V 部分对 PS 具有高亲和力，可精准标记凋亡早期细胞；iFluor 568 染料光稳定性强，不易淬灭，适合长时间成像。

稳定性：试剂需避光保存（-20°C，干燥密封），避免反复冻融，以保持活性。

&试剂信息

英文名称：Annexin V-iFluor 568 conjugate；Annexin V-iF568

中文名称：iFluor 568标记膜联蛋白V；iFluor 568标记Annexin V偶联物

激发波长：568 nm

发射波长：587 nm

状态：液体

溶解性：溶于水

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

&常见问题

（1）背景信号过高

原因：缓冲液中钙离子浓度不足或pH值异常，可能导致非特异性结合。此外，洗涤不充分或细胞碎片过多也会增加背景。

解决：确保使用新鲜配制的结合缓冲液（含2.5 mM CaCl₂），并验证pH值（通常为7.4）。增加洗涤次数（例如用PBS洗涤2-3次），并在上机前通过细胞筛去除聚集体。

（2）荧光信号弱或无信号

原因：试剂储存不当（如反复冻融或光照导致染料淬灭），或Annexin V浓度不足。细胞处理过度（如胰酶消化时间过长）也可能损伤磷脂酰丝氨酸（PS）结合位点。

解决：试剂需避光保存于-20°C，避免反复冻融（建议分装）。使用前离心试剂管，确保浓度准确。对于贴壁细胞，改用无EDTA的胰酶，并缩短消化时间。

（3）非特异性染色（假阳性）

原因：坏死细胞或膜完整性受损的细胞会允许Annexin V进入细胞内，结合所有PS残基，导致假阳性。此外，如果细胞凋亡诱导过度（如药物浓度过高），可能引起继发性坏死。

解决：始终与膜不通透性染料（如碘化丙啶PI或7-AAD）联用，以区分凋亡细胞和坏死细胞（Annexin V+/PI+）。优化凋亡诱导条件，避免细胞过度死亡。

（4）荧光淬灭或光漂白

原因：iFluor 568虽光稳定性较好，但长时间曝光或强光照射仍可能导致信号衰减。

解决：所有操作步骤（如孵育、洗涤）需在避光条件下进行。

缩短显微镜观察时间，或使用抗淬灭封片剂。对于流式细胞术，尽快上机检测（通常在1小时内）。

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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！